杭州八色鸟生物科技有限公司2017年成立,自成立以来发展迅速,已与多家高校、医院、科研院所、生物公司等建立了紧密联系,产品得到了用户的充分肯定。
公司拥有一批经验丰富、技术精湛的研发人员,已建立了成熟稳定的重组蛋白制备、单克隆抗体制备、多抗制备、纯化标记、免疫组化、免疫荧光、Western blot等技术平台。公司研发团队创立之初就意识到国产PDVF膜等产品的空缺,并开始PDVF膜的研发,经过5年多的尝试和优化,自主研发的PVDF膜产品终于问世。无论内部研发数据,还是外部科研人员试用反馈,Western blot的使用效果均可以媲美甚至优于进口品牌。
实验结果对比
● 案例1
目的蛋白大小118KD,结果与预期一致,同时能够表明结合八色鸟PVDF膜能够结合分子量较大蛋白; 同样的实验条件和曝光条件,八色鸟PVDF膜条带更强。
● 案例2 目的蛋白大小50KD,结果与预期一致;条带清晰,带型正常;背景上有零星黑点,可能是由于一 抗重复使用较久导致。
● 案例3 条带清晰,背景干净;结果与预期一致, 同样的实验条件和曝光条件,八色鸟PVDF 膜条带更强。其中八色鸟PVDF膜带型有些 弯曲,应该是转印过程导致。
常见问题
问:0.45um和0.22um两款膜我应该怎么选择?
答:膜的选择是由实验目的决定的,0.45um的使用场景相对较多,大多数的WB实验中使用0.45um,但如果检测低分子量蛋白时可选择0.22um膜(通常小于20KD会选择0.22um孔径)。
问:八色鸟PVDF膜上的预染蛋白Marker有些弱,是因为转印时间不够吗?
答:预染蛋白Marker是多个已知大小的蛋白与染料预先结合构成的,起到指示蛋白大小的作用,也有很多使用者把预染Marker看作转印是否的指标成功。八色鸟品牌PVDF膜也能够正常结合Marker,不过经过大量的实验对比,八色鸟品牌PVDF膜结合蛋白能力更强,但由于蛋白Marker与染料的结合影响了吸附到膜上的能力,导致预染蛋白Marker有些弱,并不是转印时间不够。
问:转印前一定要用甲醇浸泡吗?
答:是的。PVDF转印膜为疏水性膜,必须经过甲醇等春醇溶液浸泡才能够在水性缓冲液和转印系统中使用,PVDF膜充分浸湿后才能够实现与缓冲液中蛋白的结合。
问:WB结果条带不整齐,或者缺一块,是膜不均匀吗?
答:所有PVDF膜生产后都会进行质量检测,不会有膜不均匀情况,条带不整齐或不完整通常是由于转印操作造成,例如有气泡导致转印不均一;转印温度过高导致蛋白胶变形等。
问:背景有些黑色点点,是什么原因呢?
答:曝光结果背景不干净通常是由于封闭时间过短、抗体孵育后洗涤不够、一抗本身特异性不好;一抗或二抗重复使用导致杂质增加和曝光时间过长等原因导致,可根据实际操作适当优化调节。
实验注意事项
✓ 操作时应注意无菌条件,避免污染。
✓ 可通过丽春红染色观察PVDF膜转印情况,不影响后续免疫检测。
✓ 一抗和二抗的浓度可根据不同应用场景和初次实验结果优化。
✓ 洗涤过程需要充分,否则会增加背景。
✓ 显示染色需根据实验需要进行优化。
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